Analisi qualitativa della PCR per l'epatite C

L'epatite è una malattia grave che ha molte cause. La base del suo sviluppo è il danno diretto o indiretto al fegato. Considerando la sua importanza per l'intero organismo, si può solo intuire quanto sia difficile la patologia. In questo articolo esamineremo più in dettaglio le caratteristiche del corso e la diagnosi di laboratorio dell'epatite C.

La causa della malattia è un agente virale che si riferisce a patogeni contenenti RNA. Ha una caratteristica distintiva: la capacità di mutare, cioè di cambiare la sua struttura. A causa di ciò, l'infezione sfugge all'attacco del sistema immunitario e nella maggior parte dei casi porta a un'infiammazione cronica nel fegato.

Data l'esistenza di diversi sottotipi del virus, la selezione dei farmaci dovrebbe essere basata sui risultati della genotipizzazione. Nonostante un lungo studio della malattia e le caratteristiche della struttura dell'HCV, non è stato ancora possibile sviluppare un vaccino specifico per la malattia.

Le difficoltà della diagnosi precoce si trovano nel decorso asintomatico dell'epatite, a seguito della quale una persona visita un medico nella fase della cirrosi. Al fine di rilevare una malattia nel tempo, sono richiesti regolari esami medici. Solo attraverso test di laboratorio sul sangue è possibile rilevare l'HCV e prevenire l'infezione di chi ti circonda. Il fatto è che il vettore dell'infezione può a lungo non indovinare la patologia e continuare a trasmettere il virus a persone sane.

Modi di trasmissione

Nella maggior parte dei casi, il virus si diffonde attraverso il sangue, poiché contiene la più alta concentrazione di agenti patogeni. Quindi, l'infezione viene trasmessa:

• con emodialisi;
• con un ago infetto;
• nel processo di combattimento, quando la pelle è ferita e si verifica un contatto con il sangue;
• con trasfusione di sangue (trasfusione di sangue).

La probabilità di infezione durante l'intimità è insignificante, poiché lo sperma e le perdite vaginali contengono una piccola quantità di agenti patogeni. Il rischio di infezione è significativamente aumentato in violazione dell'integrità della membrana mucosa dei genitali. Questo è osservato con il sesso aggressivo e anale.

Per quanto riguarda la modalità verticale di trasmissione, è effettuata nel processo di lavoro. Nel periodo di gestazione del feto, l'agente patogeno non può penetrare attraverso la placenta fino all'embrione. Durante il parto naturale, l'agente patogeno viene trasmesso al bambino traumatizzando la sua pelle, quando si osserva il contatto con il sangue della madre.

Dopo la penetrazione del patogeno in un organismo sano, inizia la sintesi degli anticorpi, che sono protezione dall'infezione e appartengono alle strutture immunitarie. Si trovano nello studio iniziale di una persona che utilizza ELISA.

Per confermare la diagnosi, il paziente è sottoposto a una reazione a catena della polimerasi. È un'analisi del materiale genetico di un agente patogeno e la determinazione della carica virale.

Diagnosi di laboratorio dell'epatite C

La diagnosi di laboratorio inizia con un test immunoenzimatico. Il suo compito principale è rilevare gli anticorpi prodotti contro il patogeno. La sua efficienza è quasi del 95%. Grazie a questa ricerca, è possibile identificare il vettore del virus nella fase preclinica e inviarlo per ulteriori esami.

Un'analisi qualitativa del test ELISA indica la presenza o l'assenza di immunoglobuline nel sangue del paziente. Il risultato potrebbe essere "positivo" o "negativo". Avendo ricevuto la prima risposta, la persona viene inviata per il prossimo esame - PCR. Il suo prezzo dipende dalla qualità dei reagenti e del laboratorio. Il costo della reazione a catena della polimerasi può raggiungere i 4 mila rubli.

Funzioni PCR

Usando una reazione a catena della polimerasi, anche una piccola quantità di materiale biologico ci consente di stimare la carica virale nel sangue, cioè di calcolare la concentrazione di agenti patogeni in un millilitro di fluido.

Con l'avvento della PCR, la diagnosi di epatite è diventata molto più facile. L'analisi consente di identificare l'RNA dell'HCV, per stabilire lo stadio del processo infettivo e l'infettività della portatrice del virus.

Esistono diversi tipi di diagnosi genetica:

1. Analisi qualitativa della PCR per l'epatite C - conferma la presenza o l'assenza di HCV nel sangue del soggetto:
2. quantitativo, attraverso il quale è possibile calcolare la concentrazione di virus e stabilire lo stadio della malattia. Il risultato è dato in UI / ml o copie / ml (a seconda del laboratorio);
3. genotipizzazione: necessaria per determinare il genotipo dell'HCV. Questo è necessario per una selezione accurata dei farmaci che saranno più efficaci in questo caso. L'analisi indica indirettamente la gravità del processo patologico nel fegato. Quindi, nel terzo genotipo dell'agente patogeno, la steatosi è più spesso osservata, la cui base è l'accumulo di grasso negli epatociti (le sue cellule). Inoltre, il tipo di virus influenza l'esito e la durata del corso terapeutico.

Analisi qualitativa della PCR per l'epatite C

Prima di tutto, il materiale biologico viene esaminato in laboratorio per la presenza dell'HCV RNA. È importante ricordare che un'analisi qualitativa dell'epatite C ha un certo livello di sensibilità e quindi potrebbe non dare sempre la risposta giusta. In questo caso, si consiglia di ripetere la diagnostica di laboratorio utilizzando altri reagenti.

Per ottenere risultati affidabili, devono essere utilizzati sistemi di prova con una sensibilità di almeno 50 UI / ml.

Il risultato diagnostico può essere "positivo" o "negativo". Se l'agente patogeno non si trova nel sangue, lo studio è completato. Se nel campione viene rilevato un agente patogeno, viene quantificata una carica virale.

Una risposta falsamente negativa si ottiene quando il processo viene violato, ad esempio, componenti attivi che sopprimono la costruzione di copie del patogeno entrano nel mezzo. Pertanto, non è possibile visualizzare una vera immagine del sangue, motivo per cui l'infezione di una persona non viene diagnosticata.

Un risultato falso positivo può essere ottenuto se il tubo per la raccolta di materiale biologico, così come l'ambiente per lo studio sono stati contaminati. Inoltre, tale risposta all'analisi è possibile quando si verificano infezioni miste, quando il fegato è influenzato da diversi virus, ad esempio, epatite C e D.

Indicazioni per la ricerca qualitativa

Il medico può prescrivere a un paziente uno studio qualitativo sull'identificazione dell'RNA del virus dell'epatite C:

• al ricevimento di una risposta immunologica enzimatica positiva o dubbia;
• per la verifica della diagnosi;
• determinare la carica virale;
• impostare lo stadio della malattia;
• diagnosi di infezione mista. L'epatite C spesso infetta il fegato contemporaneamente al virus "D";
• determinazione delle tattiche terapeutiche tenendo conto del genotipo dell'agente causale;
• valutare le dinamiche dei cambiamenti durante il trattamento con farmaci antivirali.

I vantaggi della reazione a catena della polimerasi includono:

1. alta sensibilità della tecnica, che consente di stabilire il fatto di infezione in fase preclinica;
2. identificazione del materiale genetico del patogeno e non dei suoi anticorpi;
3. la possibilità di stabilire un sottotipo di un agente patogeno;
4. alto tasso diagnostico, poiché non è richiesta la semina del materiale sul mezzo nutritivo ed è sufficiente utilizzare specifici sistemi di test. Una persona ottiene il risultato dopo 5 ore;
5. versatilità. L'analisi consente di identificare qualsiasi materiale genetico (RNA, DNA). Grazie a questo, il medico può confermare l'epatite C e altri tipi di malattia (B);
6. la capacità di rilevare l'infezione latente.

Ricerca quantitativa

Nello studio del sangue utilizzando la reazione a catena della polimerasi è possibile calcolare il numero di patogeni in un volume fisso di materiale biologico. L'indicatore è presentato in UI / ml. Attraverso l'analisi, è possibile determinare il grado di contagio del paziente, determinare lo stadio del processo infettivo e anche valutare l'efficacia della terapia farmacologica.

Sulla base della PCR, lo specialista decide quali dosi di farmaci possono bloccare la riproduzione dei patogeni. Inoltre, vengono determinati la durata del trattamento antivirale e la prognosi per la vita. È importante ricordare che i sistemi di test hanno un'alta sensibilità, pertanto il metodo consente di confermare l'infezione di una persona allo stadio preclinico.

genotipizzazione

Data la capacità del patogeno di mutare, il suo genotipo è necessario per determinare la tattica del trattamento e la scelta dei farmaci antivirali. Ad esempio, il trattamento dell'HCV 1 dura 48 settimane, con una tendenza positiva osservata solo nel 60% dei casi. I genotipi 2 e 3 hanno una prognosi più favorevole. I farmaci antivirali sono prescritti per 8 mesi e la loro efficacia raggiunge l'85%.

Secondo le statistiche, nella maggior parte dei casi, HCV 1, 2 e 3 sono registrati nella Federazione Russa.

Quando si decifra un test di laboratorio, questa risposta può essere indicata - "non digitato". Ciò significa che un virus circola nel sistema circolatorio del paziente e non può essere riconosciuto dal sistema di test. Il risultato dell'analisi in questo caso indica che il patogeno non è tipico per una determinata area geografica.

Come ottenere risultati affidabili?

Affinché uno studio qualitativo della PCR per rilevare l'RNA dell'agente causale dell'epatite C abbia mostrato i risultati corretti, è necessario seguire i requisiti per la preparazione alla diagnostica di laboratorio:

1. il prelievo di sangue viene effettuato a stomaco vuoto e il gap "affamato" non dovrebbe essere inferiore a 8 ore;
2. due giorni prima dello studio, si raccomanda di smettere di bere bevande alcoliche e di abbandonare piatti piccanti, grassi e affumicati;
3. annullare l'introduzione di farmaci che riducono la coagulazione del sangue, ad esempio l'eparina. Se questi farmaci sono prescritti per motivi di salute, è necessario informare il medico. Inoltre, lo specialista dovrebbe essere a conoscenza dell'ammissione di altri farmaci che possono influenzare il risultato della ricerca di laboratorio;
4. Alla vigilia della raccolta di materiale biologico, le procedure fisioterapeutiche non dovrebbero essere eseguite e dovrebbero essere sottoposte a gravi sforzi fisici.

I risultati dell'analisi possono essere influenzati non solo dalla persona che dona sangue, ma anche da altri fattori, vale a dire:

• prelievo di sangue di scarsa qualità;
• inosservanza delle raccomandazioni sul trasporto di materiale biologico;
• formazione insufficiente dei lavoratori di laboratorio;
• non conformità con la tecnica di ricerca;
• introduzione di anticoagulanti (eparina) alla vigilia del campionamento del sangue. Questo gruppo di farmaci riduce la coagulazione, rallentando così il lavoro dei reagenti.

In diversi laboratori, la risposta diagnostica può differire leggermente, ma questi errori non influenzano il risultato finale dello studio.

Particolare attenzione è rivolta ai tipi di sistemi di test utilizzati in laboratorio. Spesso viene data preferenza ai reagenti con alta sensibilità. Questo è importante per i pazienti con bassa carica virale perché è difficile da rilevare.

Quante volte viene eseguito un test di laboratorio?

La reazione a catena della polimerasi primaria viene eseguita in persone che sono state rilevate mediante immunodosaggio per gli anticorpi contro il patogeno dell'epatite. In questo caso, viene assegnato per confermare il fatto di infezione di una persona e stabilire lo stadio della malattia. Inoltre, l'analisi consente di determinare il sottotipo del virus, che è particolarmente importante per la scelta dei farmaci.

Il periodo successivo per i test di laboratorio obbligatori è di 3 mesi dall'inizio della terapia antivirale. La diagnostica consente di valutare l'efficacia dei farmaci, regolare la dose o sostituirli.

Oltre ai test di base, la PCR può essere eseguita anche a 4 e 24 settimane dall'inizio del trattamento. Una prognosi positiva della malattia è confermata da una diminuzione della carica virale dopo tre mesi di terapia. Ad esempio, dovrebbe diminuire da 1 milione di IU / ml a diverse centinaia di migliaia.

Se la concentrazione di agenti patogeni nel sangue rimane allo stesso livello o aumenta leggermente, ciò indica l'inefficacia degli agenti antivirali e richiede la loro sostituzione. Utilizzando la PCR alla fine del trattamento, è possibile confermare il recupero del paziente.

Per interpretare correttamente i risultati della diagnostica di laboratorio, è richiesta la consulenza di un epatologo o di uno specialista in malattie infettive. Data l'alta frequenza di false risposte in ELISA, l'analisi viene utilizzata esclusivamente per lo screening primario. Per un esame più approfondito del paziente ha usato la reazione a catena della polimerasi.

Analisi pro della PCR per il virus dell'epatite C.

L'epatite C è una grave malattia del fegato per ogni persona. La patologia è causata dal flavivirus HCV, nella cui struttura è presente la molecola di RNA, che porta il codice genetico generale del virus.

La patologia può essere di forme diverse, tutto dipende direttamente dalla condizione generale della persona e dalle caratteristiche di ogni singolo organismo.

Questa struttura consente di analizzare la PCR per la presenza nel corpo di un virus della categoria di epatite C.

Ti permette di identificare tempestivamente un virus che è pericoloso per gli esseri umani, sottoporsi a un trattamento farmacologico e ripristinare la salute, proteggendo il corpo dalla distruzione del fegato.

Il virus dell'HCV può manifestarsi, sia in forma acuta - pericolosa che cronica. Se una persona in un momento o l'altro è stato rilevato questo virus, deve essere assegnato all'analisi PCR.

Perché viene eseguita l'analisi PCR?

Sulla base dei risultati dell'analisi, il medico può effettuare un trattamento

L'analisi medica di laboratorio della PCR per l'epatite C è uno studio del materiale biologico utilizzato per determinare il flavavirus. Lo studio è sinonimo di reazione a catena della polimerasi.

Mostra il valore quantitativo totale della lesione virale, le sue proprietà qualitative ed è anche possibile determinare il genotipo del virus che contiene l'RNA.

È importante! È sulla base di questa analisi che il medico determina il metodo, il tipo di terapia e la sua durata. Inoltre, attraverso l'analisi, è possibile determinare il fattore epidemiologico complessivo, cioè il livello di rischio di trasmissione della malattia ad altri vettori.

L'analisi in medicina moderna è anche chiamata analisi dell'RNA. La ragione è che insito nell'epatite C flavavirus è composto da una particella di RNA, la cui dimensione è di circa 30-60 nm. Una delle caratteristiche di questo virus è una certa propensione alla mutazione.

Ogni sottospecie o genotipo presente ha una varietà di resistenza. Questa circostanza diventa la base per vari metodi di ricerca e trattamento della malattia, nonché un'ulteriore prognosi con terapia ben condotta.

Come

L'analisi viene eseguita rigorosamente a stomaco vuoto, cioè il sangue venoso viene somministrato prima di colazione. Il metodo di prova viene eseguito mediante Real-Time PCR o estremamente sensibile con la moderna diagnostica standard, che viene eseguita in tempo reale.

Il limite inferiore di rilevazione in questo caso è 15 IU / ml. L'analisi viene effettuata rigorosamente utilizzando sistemi automatici chiusi. L'epatite C può essere determinata utilizzando test come COBAS AMPLICOR con il suo livello di sensibilità globale di 50-100 UI / ml.

È importante! Tutti i tipi di ricerche di laboratorio moderne simili sono condotte sulla base di una certa soglia di sensibilità.

Stiamo parlando della capacità del reagente utilizzato per rilevare il livello minimo della capacità del reagente di determinare il virus nel materiale biologico in studio. Se non c'è malattia nel corpo, il risultato dello studio sarà simile a "non trovato".

L'immagine mostra un circuito di analisi PCR:

Tipi di analisi PCR e relativi risultati

Se hai i disturbi e il dolore più piccoli nel campo dei cookie, dovresti consultare immediatamente un medico che effettuerà uno studio approfondito. L'analisi PCR per l'epatite C si basa su tre punti principali:

1. Analisi quantitativa
2. Analisi qualitativa
3. Genotipizzazione.

I test eseguiti forniscono l'opportunità di determinare e identificare l'esatta natura della viremia e diversi sintomi del piano genetico della presenza dell'agente patogeno. In diretta proporzione alla sensibilità, dal sistema diagnostico effettuato, la ricerca medica può essere effettuata una volta, così come alcune conferme.

Questo dovrebbe essere fatto per chiarire i risultati ottenuti in precedenza, ed è usato in questo caso da un reagente più sensibile.

PCR di alta qualità

Un'analisi qualitativa per PCR è un altro nome per uno studio come la reazione a catena della polimerasi. Con la sensibilità standard del test, che consente di determinare la presenza di un microbo virale, gli indicatori saranno nell'intervallo di 10-500 UI / ml.

Con un'analisi negativa della malattia, l'analisi mostrerà che il livello di concentrazione totale nel sangue del paziente sarà di un ordine di grandezza inferiore rispetto alla soglia di suscettibilità generale per il sistema diagnostico.

Se è stata ottenuta una risposta "non rilevata" durante la PCR di qualità, per il successivo trattamento, sarà necessario conoscere la soglia di sensibilità totale del reagente. Per quanto riguarda la risposta positiva, durante l'analisi PCR, può essere ottenuta già il 4 ° giorno dopo l'infezione. Le frazioni proteiche standard ai flavavirus consolidati possono apparire molto più tardi.

Lo schema generale delle analisi PCR può essere rappresentato come segue:

PCR quantitativa

La PCR quantitativa è un indicatore speciale della carica virale prodotta, che riflette il livello generale della concentrazione di RNA virale nel corpo umano. Questo indicatore mostra la quantità di enzimi di RNA virale presente per centimetro cubico prelevato dalla vena sanguigna.

I risultati di questo studio nel sistema di ricerca medica sono denotati in unità di un millilitro. Sui certificati emessi nelle mani, questo indicatore può essere pari a 1,7 milioni o 1,700.000 IU / ml.

L'analisi quantitativa della PCR viene assegnata a quei pazienti prima di condurre una terapia antivirale. La seconda volta si svolge la 12a settimana di trattamento, che consente di valutare correttamente i risultati della terapia con l'epatite C. In altre parole, l'analisi consente di determinare parametri importanti come:

1. Viene determinato il livello di infettività, cioè il grado di rischio di trasmissione microbica da una persona infetta a una persona sana. Maggiore è la concentrazione di RNA flavavirus, maggiore è la probabilità di infezione di un'altra persona, che è importante nelle relazioni sessuali.
2. Il livello generale di efficacia e il metodo di trattamento scelto.
3. Questa è un'opportunità ideale per determinare la durata e la prognosi della terapia antivirale. Di norma, maggiore è il carico, più a lungo dura il trattamento.

Vale la pena sapere che la PCR quantitativa dipende dal tipo specifico di test di laboratorio e dalla soglia di sensibilità. Il limite più basso dello standard stabilito è l'indicatore che non raggiunge i 600.000 IU / ml.

La media è nell'intervallo da 600.000 a 700.000 UI / ml. Se i risultati sono stati ottenuti sopra 800.000 IU / ml, il medico determina immediatamente un alto livello di concentrazione di una sostanza come RNA con un virus presente nella composizione.

È importante! La relazione diretta tra il livello di HCV RNA e la gravità della malattia indica che questo virus è presente nella composizione del sangue complessivo e rileva anche la complessità della patologia. Il paziente può avere una carica virale sufficientemente alta. Inoltre, questa relazione indica che c'è un danno abbastanza grave alle cellule.

genotipizzazione

A causa della relativamente alta attività mutazionale di HCV in natura, nel corso del test eseguito, è possibile determinare in che modo il tipo di virus è presente nel sangue di una persona malata. Nella medicina moderna sono noti 11 genotipi di un virus come l'epatite C. Comprende un discreto numero di sottospecie o sottotipi diversi.

I tipi 1,2 e 3 sono conosciuti e comuni in Russia. In generale, la genotipizzazione è un elemento molto importante dell'analisi eseguita. Con esso, il medico comprende il livello di resistenza o resistenza della patologia ai farmaci selezionati.

Quasi sempre, sulla base di questa analisi, viene costruito il trattamento futuro. Questo è importante perché ci sono regole di trattamento come:

Analisi qualitativa per l'epatite C

8 marzo 2017, 12:29 Articoli esperti: Nova Vladislavovna Izvchikova 0 10.547

Un'analisi qualitativa della reazione a catena della polimerasi - la PCR per l'epatite C determina la presenza o l'assenza di HCV nel corpo. In condizioni di laboratorio, viene studiata la struttura dell'RNA, che includerà il virus. In caso di rilevamento del virus C, è necessario sottoporsi a un ciclo di trattamento, poiché lo stato trascurato del fegato si tradurrà in gravi conseguenze. La PCR di alta qualità viene eseguita dopo il recupero per confermare l'assenza di anticorpi. Nominato e per ispezione di routine. Con una bassa concentrazione dell'agente causale nel sangue, la PCR (qualitativa) potrebbe non rilevare nulla, poiché il sistema diagnostico ha le proprie soglie di sensibilità. Nel caso della fase iniziale della malattia o della forma lieve, la PCR viene eseguita mediante analisi ultradiagnostica su apparecchiature ultrasensibili.

Cos'è il virus RNA?

Il termine RNA del virus dell'epatite C (o RNA del virus dell'epatite C) è la stessa malattia del fegato. Il virus C si lega alla cellula sana del corpo penetrando all'interno. Nel corso del tempo, si sviluppa in tutto il corpo, è necessario solo entrare nel sangue. Di conseguenza, il patogeno penetra nel fegato, si fonde con le sue cellule e lavora sodo. Le cellule epatiche (epatociti) lavorano sotto la sua influenza, subendo cambiamenti e da questo muoiono. Più a lungo il virus C è nel fegato, maggiore è il numero di cellule muoiono. Nel corso del tempo si sviluppano malattie pericolose che portano a degenerazione e morte maligne.

L'infezione del fegato con questo tipo di virus potrebbe non manifestarsi esternamente. Per molti anni o decenni, una persona infetta si sente completamente in salute, e solo un esame casuale rivela molto spesso la patologia. Durante la donazione di sangue per l'epatite, viene esaminata una porzione della catena di RNA (acido ribonucleico) che fa parte del gene umano (DNA). I risultati degli esami di laboratorio non devono essere utilizzati per l'autotrattamento, perché questo è solo un indicatore. L'immagine esatta e l'ulteriore diagnosi sono meglio determinate dal medico.

Al termine: indicazioni per la ricerca

In conferma dell'HCV, l'analisi della PCR viene eseguita (reazione a catena della polimerasi). Gli studi sulla PCR aiutano a trovare l'agente eziologico nella struttura dell'RNA e prescrivono una terapia efficace. Nominato nei seguenti casi:

• individuazione dei segni di infiammazione del fegato;
• studi di screening per la prevenzione;
• esame delle persone in contatto;
• diagnosi di epatite di origine mista (determinazione dell'agente patogeno principale);
• determinare il livello di attività riproduttiva del virus nella forma cronica;
• cirrosi epatica;
• determinare l'efficacia del trattamento prescritto.

Ricerca PCR prescrive un medico per determinare l'efficacia del ciclo di trattamento dell'epatite.

Esiste un'analisi qualitativa e quantitativa della PCR. La PCR quantitativa mostra la percentuale di RNA con i vettori del virus nel sangue e qualitativa indica la presenza o assenza virale. Un indicatore positivo di qualità (presenza di RNA dell'epatite C) richiede anche una ricerca quantitativa. Un alto livello di concentrazione dell'agente causale dell'epatite C è associato al rischio della sua trasmissione, cioè l'infezione di altri. I numeri bassi sono meglio curabili. La quantità di virus a RNA nel sangue non è correlata all'intensità della malattia. L'analisi della PCR viene eseguita anche nel caso della terapia con interferone al fine di prescrivere la durata e la complessità del ciclo di trattamento.

Caratteristiche di analisi PCR di alta qualità per l'epatite C

Un'analisi qualitativa viene assegnata con un indicatore di reazione a catena della polimerasi per tutti i pazienti che hanno anticorpi contro l'epatite C. Nel sangue, coloro che sono stati malati e recuperati devono ripetere il test. Si raccomanda di effettuare un'analisi per l'epatite B, quindi, in caso di conclusione positiva, e per l'epatite D. Inoltre, la reazione qualitativamente analizzata deve essere eseguita insieme ad altri esami del sangue. Le analisi mostreranno un quadro completo della diffusione virale.

Dai risultati del test, solo un test positivo per l'epatite C sarà visibile o negativo, cioè la presenza o l'assenza di un virus. Se l'output è "rilevato", il virus è e continua ad essere attivo. La designazione "non rilevato" indica l'assenza di un virus o la sua piccola quantità. Con questo indicatore, si dovrebbe tenere presente che la sensibilità analitica dei sistemi diagnostici è diversa e che l'epatite C dell'RNA potrebbe essere ancora nel sangue, ma non manifestarsi nell'analisi.

Un metodo PCR particolarmente sensibile rivela l'ultra epatite C anche in piccole quantità. Viene utilizzato uno studio di ibridazione a fluorescenza, che è molte volte superiore rispetto ai sistemi PCR standard. Il metodo è utilizzato in diversi casi:

• sospette forme nascoste di epatite C;
• La diagnostica della PCR non ha confermato l'agente patogeno, ma ci sono anticorpi;
• in caso di recupero;
• per rilevare l'infezione precoce.

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Analisi di decodifica

La decodifica PCR dell'HCV influisce sulla decisione finale quando si effettua una diagnosi, in particolare con il metodo ultrametod. Il principale svantaggio di questo studio è la stretta aderenza alle condizioni sterili per il campione e i materiali. Una leggera deviazione a volte mostra conclusioni analitiche imprecise, complica la diagnosi e il successivo trattamento. L'analisi della PCR per la determinazione dell'RNA dell'epatite non sempre mostra con sicurezza un quadro della malattia, a volte sono consentite imprecisioni e in entrambe le direzioni.

Diagnosticare il virus dell'epatite, si consiglia di utilizzare un esame completo.

Norma degli indicatori

L'assenza di anticorpi JgM contro l'epatite C virale nei risultati dello studio è considerata la norma nell'analisi della reazione a catena della polimerasi. Allo stesso tempo, i risultati dell'analisi sierologica indicano la presenza di anticorpi contro il virus C e questo è anche entro il range normale. Una definizione qualitativa non mostra l'intensità della malattia, ma rivela solo l'agente eziologico dell'epatite C nell'RNA. Questa analisi viene ripetuta dopo il trattamento per confermare il recupero effettivo.

deviazioni

Se sono presenti anticorpi JgM per HCV RNA, questo indica un'infezione in via di sviluppo. La malattia procede allo stesso tempo in modo acuto o cronico, manifestandosi in diverse fasi. Se viene registrata una diminuzione del numero di anticorpi, l'analisi indicherà che i risultati del trattamento sono stati raggiunti durante il recupero. Vi sono casi estremamente rari di risultati falsi positivi nella diagnostica. Si trovano nelle donne durante la gravidanza e nelle persone con altre malattie infettive.

Analisi PCR per l'epatite C

Per la diagnosi di "epatite virale cronica C (CVHS)" è necessario un esame completo della persona, che comprende studi clinici, di laboratorio e strumentali. Importante dal punto di vista della diagnosi per la diagnosi corretta è il metodo di reazione a catena della polimerasi PCR.

Che cosa mostra questa analisi e perché è necessaria?

Questo metodo di laboratorio rileva l'RNA del virus dell'epatite C nel sangue umano. Insieme al test immunoassorbente legato all'enzima (ELISA) per gli anticorpi del virus, la PCR viene utilizzata per fare una diagnosi di CVHC e il genotipo del suo agente patogeno. Questa ricerca è uno dei metodi più recenti di diagnostica di laboratorio. La sua affidabilità a CVHS supera il 97%, che è considerato un ottimo indicatore per la ricerca.

Esistono tre esami del sangue per PCR per CVHS: genotipizzazione qualitativa, quantitativa e dei virus. Il primo studio (analisi qualitativa) del virus lo rileva nel sangue e pertanto viene utilizzato solo per la diagnosi.

Il secondo studio (quantitativo) determina il grado di carica virale sul corpo, pertanto, viene utilizzato per monitorare l'efficacia della terapia.

La terza PCR (genotipizzazione) chiarisce la diagnosi, stabilendo il genotipo del virus, che è molto importante per la nomina di un corretto trattamento antivirale.

L'essenza della tecnica di reazione a catena della polimerasi è l'uso di enzimi che moltiplicano il materiale genetico del patogeno nel biomateriale. Nel processo di tale replicazione, il tubo con sangue viene riscaldato più volte e raffreddato alla temperatura richiesta per accelerare la reazione enzimatica. Come risultato di queste manipolazioni, la quantità del genoma virale aumenta molte volte, permettendole di essere rilevata anche con una quantità minima.

La diagnostica PCR ha molti vantaggi rispetto ad altri test di laboratorio:

• alta sensibilità - 97-98%;
• specificità analitica garantita (rivela esattamente l'agente patogeno che si vuole trovare, e non la sua tensione correlata);
• velocità di conduzione (non ci vogliono più di 2 giorni per ottenere una conclusione).

Tre tipi di saggi PCR

L'analisi PCR di alta qualità viene assegnata a tutti i pazienti in cui l'analisi ELISA ha rilevato anticorpi contro il virus HVGS. Dopo aver eseguito una PCR di alta qualità, è possibile ottenere due opzioni di risposta: "RNA viene rilevato" o "RNA non rilevato." Per rilevare la quantità minima di virus nel sangue, sono necessari sistemi di test con una sensibilità di almeno 50 UI / ml. Se la concentrazione del virus nel sangue del paziente è inferiore a quanto può determinare il diagnostico, il risultato dello studio potrebbe essere falso negativo. Per evitare tale errore diagnostico, i laboratori che eseguono la diagnostica PCR dovrebbero essere dotati di sistemi di test altamente sensibili. Nel laboratorio "Invitro", ad esempio, vengono utilizzati test con una sensibilità di 15 UI / ml. Gli operatori di laboratorio sono obbligati a fornire informazioni sulla sensibilità dei test a pazienti e medici alla loro prima richiesta.

L'analisi quantitativa della PCR determina il grado di viremia, cioè la concentrazione dell'agente patogeno nel sangue, la carica virale. Il risultato di questo studio, in contrasto con la PCR di alta qualità, è espresso in numeri, ad esempio 2 × 10 * 6 UI / ml, che significa 2 milioni di unità internazionali in 1 ml di sangue. Alcuni laboratori usano un altro indicatore: il numero di copie / ml. Questi due indicatori sono facili da convertire: 1 unità internazionale equivale a 4 copie di RNA. Pertanto, 2 × 10 * 6 IU / ml significherà che 8 × 10 * 6 copie di RNA virale in 1 ml, vale a dire 8 milioni di copie in 1 ml di sangue.

La genotipizzazione è la definizione di uno dei sei genotipi di un virus. Il quadro clinico, il tasso di sviluppo delle complicazioni dal fegato e la prognosi per la vita futura del paziente dipendono dal genotipo patogeno. Il genotipo del virus è molto importante già nella fase della diagnosi, poiché la combinazione di farmaci e la durata del corso terapeutico da assegnare al paziente dipendono dalla sua corretta determinazione.

Tuttavia, anche questa ricerca di laboratorio apparentemente "perfetta" ha i suoi lati negativi:

• lo studio replica il materiale genetico di tutti i patogeni, anche non viventi, che possono distorcere il risultato. Pertanto, al fine di monitorare l'efficacia con l'aiuto della PCR, la ri-analisi viene effettuata non prima di 2 mesi dopo la precedente, in modo che i virus morti possano "lasciare" il corpo del paziente;
• parte del genoma virale, che è determinata utilizzando i sistemi di test, può teoricamente essere presente in altri virus o microrganismi, quindi esiste una possibilità di una risposta falsa positiva;
• i virus mutano rapidamente. A volte la velocità e l'estensione della mutazione virale sono così elevate che il sistema di test interrompe la cattura del genoma. Di conseguenza, è possibile un risultato falso negativo.

Per ovviare a queste carenze, i produttori di sistemi di test di laboratorio per la diagnostica PCR conducono costantemente i loro test, comprese le reazioni incrociate e la sensibilità a un particolare genotipo del virus.

Come fare un test PCR per l'epatite C?

Affinché la conclusione di un esame PCR sia affidabile, è necessario osservare scrupolosamente le regole di preparazione per la sua condotta:

• lo studio è condotto a stomaco vuoto (glucosio, grassi, minerali che entrano nel sangue dal cibo, possono influenzare la velocità e la qualità della reazione enzimatica);
• il divario tra l'ultimo pasto e il prelievo di sangue per l'analisi dovrebbe essere di almeno 8 ore;
• alla vigilia dello studio è vietato prendere alcolici e consumare cibi grassi, il cui periodo di eliminazione è protratto;
• un giorno prima di andare in laboratorio dovrebbe evitare forti stress fisici ed emotivi;
• fino al momento del prelievo di sangue non è raccomandato fumare.

Al fine di evitare la comparsa di false conclusioni, il presunto paziente deve venire in laboratorio un po 'prima del prelievo di sangue. Ci vogliono 15-20 minuti perché una persona riprenda fiato, calmati. L'adrenalina, che è presente nel sangue dopo una breve passeggiata, può influenzare il risultato dell'esame.

Se il paziente di riferimento per l'analisi prende qualche farmaco, dovrebbe comunicarlo al medico. È possibile che alcuni di essi debbano essere rifiutati per qualche tempo (se possibile).

Il risultato dell'analisi della PCR per l'epatite C

Decodifica i risultati coinvolti nel medico di laboratorio del laboratorio che ha condotto l'analisi. La decodifica è la determinazione della deviazione del risultato ottenuto dalla norma. Il tasso di indicatori è stabilito direttamente dal produttore del sistema di test, che viene utilizzato dal laboratorio per la diagnostica. Pertanto, non sorprende che in alcuni laboratori la carica virale sia determinata in UI / ml e in altre copie / ml.

Una volta ricevuta la conclusione, è necessario essere in grado di interpretarla correttamente. Il trattamento dei risultati dello studio deve essere eseguito dal medico curante del paziente con epatite C. Solo dopo un esame obiettivo, strumentale e di laboratorio del paziente, il medico può ottenere una quantità sufficiente di dati per una corretta interpretazione dei risultati ottenuti dalla PCR.

La valutazione di analisi qualitativa, di regola, non causa difficoltà, perfino in pazienti. Il risultato può essere solo uno: "rilevato" o "non rilevato". In questo caso, il secondo di loro è la norma.

Gli indicatori dell'analisi quantitativa sono più difficili da interpretare. Mostra il grado di carica virale sul paziente. Anche tra gli epatologi, non c'è consenso su come trattare la viremia rilevata. La maggior parte dei medici è incline a ritenere che debba essere preso in considerazione un carico elevato di oltre 8 × 10 * 5 UI / ml. Un carico superiore a 1 × 10 * 7 UI / ml è considerato molto alto, mentre un carico ridotto è inferiore a 4 × 10 * 5 UI / ml.

Il grado di carica virale indica virulenza (aggressività) del virus: maggiore è la sua quantità nel sangue, più velocemente si possono sviluppare le complicanze del fegato. Un'alta concentrazione del virus nel sangue di una donna incinta aumenta la probabilità della sua penetrazione attraverso la barriera emato-placentare al feto. La viremia influisce anche sull'efficacia del trattamento: con un numero basso, l'efficacia della terapia è più alta che con quelle elevate.

Per essere certi della precisione dell'analisi della PCR per l'epatite C, è necessario dare la preferenza solo a quei laboratori che sono ben provati. La politica dei prezzi in questo caso non dovrebbe svolgere un ruolo primario.

Uso della diagnostica PCR

La reazione a catena della polimerasi (PCR) in biologia molecolare è un metodo sperimentale per rilevare i virus. Consente di aumentare significativamente la concentrazione di alcuni frammenti di acido nucleico (DNA) in campioni di materiale biologico, che consente di determinarli (riconoscerli) e contarli.

L'analisi viene eseguita come segue. Il materiale genetico (un campione di sangue), che può potenzialmente includere il gene desiderato, viene introdotto nel tubo. Ci sono anche primer piazzati - segmenti sintetizzati chimicamente di una piccola lunghezza del gene desiderato.

Il DNA o RNA polimerasi viene anche aggiunto al vaso, è in grado di allineare una catena di acido nucleico che è completamente identico all'originale. La composizione risultante è iniettata e una serie di quattro nucleotidi liberi - uno speciale materiale da costruzione per RNA o DNA, uno dei quali contiene particelle di fosforo radioattive.

La miscela risultante viene riscaldata a 95-96 ° C, motivo per cui sono tessute due eliche di DNA, che sono normalmente intrecciate. Quindi il farmaco viene raffreddato, momento in cui i primer stessi si attaccano alla regione desiderata del genoma virale, impedendo all'RNA (o al DNA) di riformare la doppia elica.

Nel processo di raffreddamento, la polimerasi cerca una catena nucleotidica libera. Per il funzionamento di questo enzima è necessaria una singola catena di nucleotidi. Poiché la polimerasi scivola lungo la catena del DNA (come un anello su una corda), non è in grado di lavorare su una doppia elica.

Dopo questo, viene eseguito un ciclo di riscaldamento ripetuto, a causa del quale si separano le catene di nucleotidi. A ciascuno di questi cicli di PCR, la quantità nel campione del gene desiderato di epatite aumenta esponenzialmente, e il resto del materiale genetico viene prodotto (cresce) in modo lineare.

Dopo la purificazione della soluzione dai residui nucleotidici e la separazione mediante elettroforesi delle catene di DNA mediante il parametro del peso molecolare, si può facilmente determinare se nel campione in esame è presente o meno un gene desiderato.

Benefici della PCR

I test di laboratorio che utilizzano la PCR consentono di ottenere ancora più informazioni rispetto alla presenza dell'RNA del virus. Determinando il parametro del livello di radiazioni radioattive, è possibile identificare la quantità di materiale genetico originariamente contenuto nel campione in esame. Nel caso dell'epatite B, determinare l'indicatore di carica virale.

Un altro vantaggio di questo metodo è l'alto grado di sensibilità della reazione CR. È molto più alto dei metodi classici di rilevamento dei virus. Idealmente, per identificare il gene desiderato, per la PCR, è sufficiente un solo virus nel campione.

Inoltre, la PCR è completamente specifica. I suoi primer sono progettati in modo tale da corrispondere completamente alle regioni uniche dei geni desiderati che nessun'altra sequenza ha. Come le impronte digitali sono uniche, ogni gene ha sequenze uniche di nucleotidi.

Analisi qualitativa della PCR

L'analisi qualitativa rivela solo la presenza del virus nel sangue. Questo test deve essere eseguito per tutti i pazienti in cui sono stati trovati nel sangue anticorpi contro l'epatite C. Può determinare solo uno dei due valori: "rilevato" o "non rilevato". In una persona sana, la norma (valore di riferimento) dovrebbe essere "non rilevata".

C'è un'interpretazione speciale di tali risultati della ricerca qualitativa:

• Il risultato è "rilevato". Ciò significa che nel campione analizzato di materiale biologico prelevato è stato trovato un frammento di RNA specifico per il virus dell'epatite C. Di conseguenza, il paziente è infetto dal virus dell'epatite C. Se il risultato della PCR di alta qualità viene "rilevato", ciò indica che il virus si moltiplica e in questo momento infetta nuove cellule epatiche nel corpo.
• Il risultato è "non rilevato". Tale verdetto indica che nel campione analizzato del materiale biologico ottenuto in questo laboratorio non è stato trovato un frammento di RNA specifico per il virus dell'epatite C. In alternativa, la concentrazione dell'RNA dell'infezione da patogeno in questo campione era inferiore al limite di sensibilità del test.

Nella fase acuta dell'RNA del virus dell'epatite C, tali studi qualitativi con il metodo PCR possono essere rilevati già dopo 1-2 settimane immediatamente dopo l'infezione del corpo, cioè molto prima della comparsa di anticorpi contro l'epatite stessa.

Risultati di test inaffidabili di questo studio possono essere ottenuti da:

• biomateriale contaminato;
• la presenza di eparina nel sangue del paziente;
• la presenza nel campione di sostanze chimiche o proteiche (inibitori) che influenzano i vari componenti della PCR.

Per condurre un'analisi qualitativa della PCR, non è richiesta alcuna preparazione specifica del paziente per lo studio. Il materiale utilizzato è sangue venoso.

Valutazione dei risultati

I test PCR di alta qualità hanno un certo grado di sensibilità e, a seconda dell'accuratezza della ricerca e del livello delle apparecchiature in laboratorio, possono variare da 10 a 500 UI / ml.

Ciò significa che se il virus nel campione di sangue è presente in una concentrazione molto bassa (inferiore al valore soglia della sensibilità di questo laboratorio), il risultato per il paziente malato può essere "non rilevato". Per questo motivo, quando si esegue un'analisi qualitativa della PCR con un basso livello di viremia (bassa concentrazione virale), ad esempio, per i pazienti sottoposti a terapia antivirale, è molto importante conoscere la soglia di sensibilità di questo sistema diagnostico.

Varianti di sistemi diagnostici

Per controllare la risposta virologica, si raccomanda di utilizzare sistemi diagnostici con una soglia di sensibilità di almeno 50 UI / ml durante il trattamento antivirale. Questi criteri sono soddisfatti, ad esempio, con gli analizzatori Cobas Ampicolor HCV-Test (accurati a 50 IU / ml), nonché RealBest HCV RNA (con una sensibilità di 15 IU / ml).

Secondo le raccomandazioni dell'OMS, per stabilire una diagnosi definitiva dell'epatite C, è necessario basarsi solo sulla base del rilevamento triplo dell'RNA del virus C nei campioni di siero del paziente, in assenza di altre varietà di marcatori dell'epatite.

Oltre ai metodi di PCR, un test TMA (metodo di amplificazione trascrizionale) viene anche utilizzato per rilevare l'RNA dell'HCV nei pazienti. Ha la migliore soglia di sensibilità (5-10 IU / ml), ma nel nostro paese tale metodo di prova non è ancora molto comune.

La gamma di modifiche ai virus rilevate

Una tale determinazione qualitativa nel siero della presenza dell'RNA del virus dell'epatite C rende possibile determinare diversi genotipi di questo virus. Attualmente, la scienza conosce più di sei genotipi di questo virus, così come circa 10 sottotipi di questa malattia.

Nel nostro paese, virus comuni 1, 2, 3 genotipi. I laboratori possono rilevare i seguenti genotipi: 1a e 1b, 2a, 2b e 2c, nonché 3, 4, 5a e 6, indipendentemente dai sottotipi. Per tutte le modifiche ai virus, la specificità del rilevamento è del 100%.

Analisi quantitativa PCR

Utilizzando un test PCR quantitativo, viene determinato il livello di concentrazione del virus dell'epatite nei campioni di sangue (carica virale). Questo test per la viremia (concentrazione virale) consente di determinare il numero di unità di un determinato materiale genetico (l'RNA virale stesso), che viene rilevato in una certa quantità. In questo caso, determinare la sua concentrazione in 1 ml, che corrisponde a 1 cu. cm.

I parametri quantitativi dell'analisi sono espressi in cifre, per questo scopo le unità internazionali (UI) per millilitro (ml), indicate come UI / ml, sono utilizzate come unità di misura. Ora, in alcuni laboratori, la quantità di virus può essere determinata in altre unità: il numero di copie per ml è indicato come copie / ml.

• Date. Per l'epatite C, tale analisi quantitativa della PCR viene eseguita immediatamente prima dell'inizio della terapia. Quindi il 1 °, 4 °, 12 ° e 24 ° settimana. La valutazione della dodicesima settimana è indicativa, consente di determinare l'efficacia della terapia.
• Preparazione per l'analisi. Per l'analisi quantitativa della PCR, non è richiesta alcuna preparazione specifica del paziente per lo studio. Mezz'ora prima del campionamento non fumare. Il sangue venoso è usato come materiale di laboratorio.

Valutazione dei risultati

Per diversi sistemi di test di laboratorio, ci sono diversi fattori di conversione per questo indicatore in UI / ml. In media, prendono il parametro di conversione, in cui 4 copie / ml = 1 IU / ml. Cioè, per esempio, se il laboratorio fornisce il risultato dell'analisi PCR 2.4 * 10 6 copie / ml, allora questo parametro dovrebbe essere diviso in 4 e otterremo 6 * 10 5 IU / ml.

Un carico di 800.000 IU / ml è considerato alto, che corrisponde approssimativamente a 3.000.000 di copie / ml. La bassa viremia, secondo alcuni autori, corrisponde ai parametri della PCR quantitativa inferiore a 400.000 IU / ml.

Come risultato del test quantitativo, i risultati finali possono essere forniti non sotto forma di un valore digitale, ma: "sotto l'intervallo di misurazione" o "non rilevato".

• Valutazione: "al di sotto dell'intervallo di misurazione". Ciò indica che il test quantitativo non è riuscito a rilevare l'RNA virale dell'epatite C, tuttavia, il virus stesso è presente nel corpo in concentrazioni molto basse. Ciò è evidenziato dal test di qualità aggiuntivo, che conferma il fatto della presenza del virus.
• Valutazione: non rilevata. Questo risultato indica che il test quantitativo non è stato trovato nel virus RNA di esempio.

Il parametro della carica virale, prima di tutto, determina il grado di infettività della malattia, il livello di "infettività" del paziente. Maggiore è la concentrazione del virus del paziente, maggiore è la probabilità di trasmetterlo ad altre persone. Ad esempio, durante i rapporti sessuali con una persona malata, o in verticale. Questo indicatore quantitativo aiuta anche a determinare l'efficacia del trattamento del paziente.

Condurre un'analisi quantitativa del PCC è importante per la terapia antivirale, valutarne il successo e pianificare la durata del corso. Pertanto, con una risposta rapida del corpo al trattamento e un basso grado di viremia, la durata della terapia può essere ridotta.

Se il parametro quantitativo della PCR viene lentamente ridotto, la terapia antivirale deve essere estesa o modificata. Se il livello di carica virale è basso, questo è un fattore favorevole nella terapia: se elevato, il metodo utilizzato è inefficace e i farmaci oi metodi del loro uso dovrebbero essere modificati.

Analisi qualitativa e quantitativa della PCR per l'epatite C: negativa, positiva, trascrizione

L'epatite C è una malattia epatica virale causata dal flavivirus HCV (dal virus dell'epatite C inglese), la cui struttura contiene una molecola di acido ribonucleico (RNA). L'RNA porta il codice genetico del virus. La sua presenza consente l'analisi della PCR per l'epatite C.

Il pericolo di HCV per una persona risiede nel fatto che la cosiddetta finestra sierologica (il tempo che intercorre tra l'infezione e l'aspetto di una reazione del sistema immunitario) può essere piuttosto lunga, da diverse settimane a sei mesi.

Non rileva l'infezione e inizia il trattamento in tempo.

A seconda delle caratteristiche individuali dell'organismo, il portatore dell'HCV può manifestarsi in forma acuta, oltre a presentarsi come una malattia cronica che richiederà un trattamento lungo e costoso. Nel rilevamento di anticorpi anti-HCV, vengono condotti una serie di test di laboratorio, inclusa PCR per l'epatite C. Questo test viene eseguito a tutte le persone nei cui anticorpi del sangue sono stati trovati HCV.

Cos'è l'analisi PCR?

Analisi di laboratorio della PCR per l'epatite C - uno studio di materiale biologico per identificare la presenza di flavavirus.

La reazione a catena della polimerasi (come indica l'abbreviazione) mostra il valore quantitativo del danno virale del corpo, le sue caratteristiche qualitative e il genotipo del virus che contiene l'RNA.

Sulla loro base, così come sulla base di ulteriori analisi, viene determinato il metodo e la durata della terapia, nonché il fattore epidemiologico (il grado di rischio di trasmissione ad un'altra portante).

Cos'è l'analisi dell'epatite C RNA?

L'epatite C PCR è anche chiamata analisi RNA (HCV RNA), perché Il flavavirus contiene una particella di RNA con una dimensione di virione di 30-60 nm. Una delle caratteristiche di questo microrganismo è un'alta propensione alle mutazioni.

Ciascuna sottospecie (genotipo) del virus ha una resistenza diversa, che causa diversi metodi di trattamento e la natura dell'ulteriore prognosi per il paziente.

Il materiale biologico (sangue venoso) viene somministrato a stomaco vuoto e, di norma, viene testato con il metodo Real-Time PCR (diagnostica in tempo reale altamente sensibile con un limite di rilevamento inferiore di 15 UI / ml utilizzando sistemi automatici chiusi).

Esistono altri test, ad esempio COBAS AMPLICOR con una sensibilità di 50-100 UI / ml. Per qualsiasi test di laboratorio, la soglia della sensibilità è importante, vale a dire la capacità del reagente di rilevare la concentrazione minima di virus in materiale biologico.

Tipi di analisi per l'epatite C mediante PCR

La PCR dell'epatite C include tre componenti importanti:

• analisi qualitativa;
• analisi quantitativa;
• genotipizzazione.

Questi test possono determinare la natura della viremia e le caratteristiche genetiche del patogeno. A seconda della sensibilità del sistema diagnostico, lo studio viene eseguito una sola volta ea volte viene eseguito un secondo test con un reagente più sensibile per confermare o perfezionare i risultati.

Epatite C PCR di alta qualità

L'analisi PCR dell'epatite C qualitativa è un altro nome comune per l'analisi della reazione a catena della polimerasi. La sensibilità standard del test, che consente di rilevare la presenza di lesioni virali, è nell'intervallo di 10-500 UI / ml.

Un'analisi PCR negativa per l'epatite C mostra che la concentrazione del virus nel sangue del paziente è al di sotto della soglia di suscettibilità del sistema diagnostico.

Se la PCR di alta qualità ha dato la risposta "non rilevata", quindi per il trattamento successivo è importante scoprire la soglia di sensibilità del reagente.

Le frazioni proteiche di flavavirus appaiono molto più tardi.

PCR quantitativa dell'epatite C

Il quantitativo di PCR dell'epatite C è un indicatore della carica virale, che riflette il livello della concentrazione di RNA di flavavirus nel corpo. Questo è un indicatore che mostra quanti frammenti di RNA virale sono contenuti per centimetro cubo di sangue. I risultati della PCR dell'epatite C RNA in un test quantitativo nel sistema convenzionale sono indicati in unità internazionali per millilitro (IU / ml) e possono essere registrati in diversi modi, ad esempio 1,7 milioni o 1,700,000 UI / ml.

La diagnostica quantitativa della PCR dell'epatite C viene prescritta ai pazienti prima dell'inizio della terapia antivirale e alla 12 ° settimana di trattamento, al fine di valutare i risultati del metodo scelto per trattare l'HCV. Il carico virale consente di determinare tre importanti indicatori della malattia:

• infettività, vale a dire il grado di rischio di trasmissione del virus da un portatore all'altro (maggiore è la concentrazione di RNA di flavavirus, maggiore è la probabilità di infettare un'altra persona, ad esempio attraverso il contatto sessuale);
• metodo ed efficacia del trattamento;
• la durata e la prognosi della terapia antivirale (maggiore è la carica virale, più dura il trattamento).

La diagnostica quantitativa della PCR dell'epatite C dipende dal tipo di test di laboratorio e dalla soglia della sua sensibilità. Il limite inferiore della norma è considerato l'indicatore fino a 600.000 UI / ml, il valore medio è compreso tra 600.000 e 700.000 UI / ml. I risultati di 800.000 UI / ml e oltre sono considerati alti livelli di virus contenente RNA.

genotipizzazione

A causa dell'alta attività mutazionale di HCV in natura, durante il test, è importante identificare quale genotipo del virus si trova nel sangue del paziente. In totale, sul pianeta sono stati registrati 11 genotipi del virus dell'epatite C, che comprendono molte sottospecie (sottotipi). Sul territorio della Federazione Russa distribuiti 1,2 e 3.

L'RNA dell'epatite C PCR insieme alla genotipizzazione è una componente molto importante dell'analisi, dal momento che consente al medico di determinare la resistenza (resistenza) del virus, selezionare i farmaci appropriati e prescrivere un ciclo di trattamento.

La genotipizzazione consente anche la determinazione indiretta dello stato del fegato. Ad esempio, il genotipo 3 di HCV è spesso accompagnato da steatosi, in cui il grasso si accumula nelle cellule dell'organo.

Un esame del sangue per PCR per l'epatite C dovrebbe produrre una figura che determina il genotipo. Le risposte di laboratorio possono dire "non digitate" - e questo significa che un virus è nel sangue umano che non viene rilevato dal sistema di test. Questo potrebbe indicare che il genotipo non è tipico per una determinata area geografica. In questo caso, è necessario ripetere l'analisi con una maggiore sensibilità del sistema diagnostico.

Decodifica dell'analisi PCR per l'epatite C.

Il test per la decrittografia quantitativa della PCR dell'epatite C può essere basato sui dati sopra riportati. Quando si ottengono i risultati dei test di laboratorio, vengono solitamente scritti i seguenti dati:

• "Trovato" / "non trovato" (PCR di alta qualità per l'epatite C);
• il numero di frazioni contenenti RNA, ad esempio 831,680 ME / ml (analisi PCR quantitativa);
• la figura che determina il genotipo di HCV, ad esempio - 1, 2, 3, 4;
• Il nome del test è più spesso in tempo reale.

La cosa più importante nel decifrare l'analisi PCR per l'epatite C è il secondo elemento, che mostra la carica virale, che determina la prognosi, il metodo e la durata del trattamento.

Se il test PCR per l'epatite C è negativo e l'ELISA è positivo, che cosa significa?

Per decifrare i test di laboratorio, è importante contattare un epatologo o uno specialista di malattie infettive che spiegherà le informazioni ottenute in base al tipo di sistema diagnostico e alla sua soglia di sensibilità. Nella pratica medica, ci sono molti dati di analisi del sangue che possono indurre in errore una persona senza istruzione medica.

Ad esempio, se il test per l'epatite C PCR è negativo e il test ELISA è positivo, può significare che non vi è HCV nel sangue del paziente al momento, ma in precedenza ha sofferto di una forma acuta di epatite C. Si ritiene che un saggio positivo all'immunosorbente legato all'enzima (ELISA) mostri che ci sono anticorpi nel sangue che sono stati prodotti dopo l'invasione del virus in passato. Ma nella moderna pratica medica, l'analisi ELISA è considerata insufficientemente affidabile e spesso dà risultati atipici, quindi i medici la usano come screening primario. Durante la diagnosi di una malattia, gli specialisti vengono guidati con precisione mediante test PCR.

Video utile

Il seguente video racconta in modo molto dettagliato e interessante qual è l'essenza del metodo PCR, come viene condotta l'analisi:

conclusione

Per l'analisi della PCR dell'epatite C, di solito viene prelevato il sangue venoso. Molto spesso c'è una doppia assunzione di materiale biologico - per ELISA e direttamente per il test PCR. Per risultati corretti del test, è richiesta la conformità con le regole di base per la raccolta in laboratorio di materiale biologico:

• sangue per analisi è dato nella prima metà della giornata a stomaco vuoto;
• tra il pasto e la raccolta del sangue dovrebbero impiegare almeno 8 ore;
• Anche alcol e cibi fritti dovrebbero essere esclusi prima di iniziare il test.
• durante il giorno prima della donazione di sangue è necessario evitare uno sforzo fisico elevato.

I risultati delle analisi del sangue sono solitamente pronti il ​​giorno successivo.