Il tasso di analisi quantitativa per l'epatite B

La disponibilità di moderni farmaci antiepatite B (HBV) con chiare indicazioni per la loro somministrazione richiede una verifica accurata e rapida della diagnosi. Tuttavia, a causa di scarsi dati clinici nelle prime settimane della malattia e di metodi di analisi immunologici limitati, il tasso di diagnosi diminuisce.

La presenza di marker anti-HBc IgM, HBsAg, anti-HBc, HBeAg, anti-HBe consente di confermare l'HBV o stabilire il fatto di una precedente malattia. Ma è possibile determinare la presenza di particelle virali attive nel sangue e contare il loro numero al momento dello studio mediante PCR - un test quantitativo in tempo reale per la rilevazione dell'epatite B. Il metodo, rispetto ai metodi diagnostici ELISA, risolve i problemi diagnostici e consente di predire il decorso della malattia durante la ricezione farmaci antivirali.

Nozioni di base sulla diagnosi della malattia

La diagnosi di epatite B si basa sulla valutazione delle manifestazioni cliniche, del saggio immunoenzimatico e dei metodi strumentali di ricerca. La malattia si verifica nella fase acuta dopo il periodo di incubazione e, a seconda della dose di infezione e dell'efficacia del trattamento, entra in uno stadio cronico. L'obiettivo principale del trattamento è quello di prevenire la cronizzazione, cioè l'eliminazione di tutte le particelle virali dal sangue. Il decorso clinico della malattia è una cura senza successiva viremia.

Il fatto di eliminare l'infezione deve essere dimostrato da un metodo quantitativo di ricerca.

Poiché qualsiasi test immunoenzimatico qualitativo rende possibile la diagnosi indiretta dell'HBV, cioè non mostra la presenza dell'agente patogeno nell'ambiente interno del corpo, ma caratterizza la risposta immunitaria all'infezione, monitorando l'efficacia della terapia e il fatto di curare diventa difficile da dimostrare. Pertanto, il paziente con epatite B o con la presenza di criteri diagnostici a suo favore deve essere effettuato la reazione a catena della polimerasi al fine di quantificare il numero di particelle virali nel sangue. Il tasso diagnostico è la mancanza di copie del DNA dell'infezione.

Descrizione del metodo diagnostico

Il metodo altamente sensibile della diagnosi di PCR dell'epatite B appartiene alla categoria degli studi biologici molecolari ingegnerizzati geneticamente. Attraverso esso è determinato dalla quantità di DNA virale nel materiale biologico del paziente e il tasso ammissibile. In base ai risultati ottenuti, viene stabilito il numero di particelle virali per unità di volume. Il materiale per il test diagnostico è il sangue venoso del paziente. Un'assunzione è desiderabile a stomaco vuoto a causa del possibile effetto del siero chilo sul risultato dello studio.

I risultati ottenuti devono essere forniti al medico per l'interpretazione e la determinazione di ulteriori tattiche. La decodifica indipendente non rappresenta un valore diagnostico.

Il significato del risultato del numero di particelle virali ottenuto con il metodo PCR supera il valore dei saggi immunologici enzimatici. Poiché l'analisi in modalità in tempo reale mostra la presenza dell'agente causativo della malattia nel sangue, il suo contenuto informativo è superiore ad altri. Se il test ELISA indica solo la presenza di anticorpi, osservati da 4 settimane del periodo di incubazione e che durano più di 8 settimane dopo l'eliminazione del virus dal sangue, la reazione a catena della polimerasi conferma chiaramente il decorso attivo della malattia o la sua cura, caratterizza la dinamica della terapia prescritta.

La reazione a catena della polimerasi con determinazione quantitativa delle particelle patogene risolve le domande diagnostiche a favore dell'arresto del trattamento a causa del recupero o della terapia continua a causa della sua mancanza di efficacia. Il metodo è il più specifico possibile per il virus HBV e si distingue per un errore accettabile.

Indicazioni e obiettivi di prestazione

L'analisi quantitativa dell'epatite B è la più affidabile e consente di confermare i dati ottenuti con i metodi ELISA. Viene nominato quando:

  1. ottenere un risultato diagnostico positivo di ELISA;
  2. trattare un paziente con una diagnosi accertata di danno epatico virale;
  3. nella diagnosi di epatite mista eziologia;
  4. se necessario, determinare la carica virale in un paziente.

Poiché il metodo del saggio immunologico enzimatico è usato più ampiamente nella pratica di uno specialista di malattie infettive, alcuni pazienti con malattia lieve possono essere trattati senza dover contare la carica virale. Ma la PCR è generalmente considerata il "gold standard" della diagnostica in epatologia, poiché, a causa dell'unicità del suo risultato, rimuove una serie di problemi organizzativi. Pertanto, la direzione del paziente per l'analisi quantitativa ha i seguenti obiettivi:

  • ottenere dati sul numero di particelle virali nel sangue del paziente;
  • conferma del decorso acuto dell'epatite e verifica tempestiva della malattia cronica;
  • rilevamento costante di portatori di virus latenti con test ELISA positivi, monitoraggio della loro viremia;
  • decidere la nomina di un trattamento antivirale, la sua combinazione e la risoluzione.

L'obiettivo più significativo di applicare un test quantitativo di PCR per rilevare l'HBV è identificare possibili combinazioni di trattamento. In caso di elevata carica virale, il risultato dell'analisi offre allo specialista l'opportunità di procedere con la combinazione di farmaci. Durante la terapia, è facile determinare l'efficacia del trattamento farmacologico prescritto in base al risultato della PCR. Guidato solo dai dati dei metodi di immunodosaggio, è impossibile determinare tempestivamente il fatto del trattamento e la sua efficacia attuale. Pertanto, un test quantitativo in tempo reale è un'analisi necessaria prima di iniziare il trattamento per l'epatite acuta, l'infezione da virus latente con alta viremia e HBV cronica.

Interpretazione dei risultati quantitativi della prova PCR

L'interpretazione dei risultati del test quantitativo della PCR deve essere eseguita dal medico curante del paziente. È necessario valutare l'indicatore diagnostico e determinare le tattiche terapeutiche.

Un analizzatore standard è in grado di produrre un indicatore quantitativo che rifletta il numero di copie del DNA virale presente nel sangue venoso studiato. Unità di misura: copie / ml, UI / ml (copie per millilitro, unità internazionali per millilitro). L'interpretazione dei risultati è riportata nella tabella con l'indicazione delle diverse unità di misura.

Decifrazione dell'analisi del sangue per l'epatite B

L'epatite B è una delle malattie più pericolose del nostro tempo.

È causato da un virus che entra nel corpo quando il sangue entra in contatto con materiale biologico infetto, compresi quelli che rimangono su accessori per manicure, strumenti medici, macchine per tatuaggi che non sono state disinfettate nel modo corretto. Il virus può anche essere trasmesso attraverso il contatto sessuale.

L'epatite B viene analizzata per diagnosticare la malattia prelevando il sangue del paziente.

L'infezione avviene attraverso percorsi sessuali e domestici, il tipo di diffusione è ematogena (attraverso il sangue). Una volta infettato, il virus entra negli epatociti (cellule epatiche), che viene prodotto in futuro. Attraverso il flusso sanguigno, la malattia si sta rapidamente diffondendo in tutto il corpo. Il virus B (HBV) è caratterizzato da un'elevata resistenza agli effetti della temperatura e dell'acido ed è in grado di mantenere le sue proprietà dannose per sei mesi.

Quali esami del sangue hai per l'epatite B?

Se l'epatite B ha mostrato i primi sintomi, è necessario superare i test prima di iniziare la terapia e il trattamento. Un esame del sangue è un metodo affidabile per l'installazione dell'infezione da epatite. Condotto in laboratorio. Il materiale di test dell'epatite B viene somministrato a stomaco vuoto: un minimo di 8 ore deve passare dall'ultimo pasto.

Per rilevare il virus dell'epatite B nel sangue, vengono utilizzati test di tre tipi che caratterizzano la presenza del virus nel sangue:

  • analisi per la presenza di DNA di HBV nel materiale studiando la reazione a catena della polimerasi;
  • studio qualitativo della presenza della proteina IgG anti-HBc e dell'antigene HBsAg (presente in soggetti sani, infetti e malati);
  • analisi per il rilevamento di proteine ​​HBeAg e anti-HBc IgM (caratterizzano il peggioramento della malattia).

Per completezza, si consiglia di condurre simultaneamente ricerche su diversi marker.

Test immunologici per l'epatite B

I test più comuni per l'epatite B sono immunologici. La loro essenza è di rilevare gli anticorpi nel sangue prodotto dal corpo o dal fegato. I campioni sono qualitativi e quantitativi. I test e le trascrizioni dell'epatite B di solito contengono informazioni su diverse proteine ​​caratteristiche. Durante il test, vengono testati i seguenti anticorpi:

Si manifesta nelle prime fasi dell'infezione prima dell'insorgenza dei segni clinici.

Un marker positivo indica la presenza di un virus, ma si trova anche in persone completamente sane. Se nel sangue è presente meno di 0,05 UI / ml, il risultato è considerato negativo. Se la concentrazione dell'anticorpo è più alta, l'analisi è considerata positiva.

Si trova praticamente in ogni paziente infetto. Mantenere gli indicatori ad alto livello può indicare una transizione della malattia in una forma cronica del corso. Un marker positivo indica la presenza della malattia nel periodo di esacerbazione, recupero prolungato. L'HBeAg è un segno estremamente negativo. Il paziente è molto contagioso. Normalmente, la proteina non viene rilevata nel sangue.

Esistono due tipi di anticorpi anti-HBc: IgG e IgM. La presenza di IgM nel sangue è un segno del decorso della forma acuta, l'alta infettività del paziente e la possibilità della malattia pererohoda nella forma cronica. Normalmente, la presenza di IgM non è consentita. IgG è un indicatore favorevole. Il marcatore indica l'immunità corporea contro l'epatite B.

Se viene rilevato un marcatore nel sangue, si può trarre una conclusione sul decorso favorevole della malattia e sulla formazione dell'immunità protettiva nel paziente.

  • Anti-HBs.

Il segnale segnala il recupero e la formazione di immunità.

Rilevazione del DNA dell'HBV mediante PCR

Per l'analisi di laboratorio e il rilevamento della presenza di una diagnosi di epatite B nel sangue, viene utilizzato il metodo PCR. Il modo in cui viene considerata la reazione a catena della polimerasi è il più aggiornato nel campo del rilevamento della malattia.

La decodifica finale mostra se ci sono tracce della presenza genica del patogeno nelle cellule del fegato.

Se tutti i principi vengono seguiti durante la ricerca, il risultato è assolutamente accurato. Il metodo viene utilizzato per la diagnosi, utilizzato nel processo di trattamento e nella terapia antivirale.

  1. Una PCR di alta qualità sul totale ha solo due significati: "rilevato" e "non rilevato". La procedura viene eseguita per ogni paziente con sospetta epatite. Con una sensibilità media del test PCR nell'intervallo da 10 a 500 UI / ml, con bassi livelli di DNA di virus nel sangue, non verrà rilevato alcun materiale genico.
  2. PCR quantitativa. In contrasto con la qualità, indica non solo l'epatite B. L'analisi quantitativa indica fino a che punto la norma di una persona sana è lontana dagli indicatori del paziente in termini numerici. Il metodo consente di valutare lo stadio della malattia e prescrivere il trattamento. La sensibilità del test PCR in seguito quantitativo è superiore rispetto al metodo qualitativo. La base è il conteggio del DNA rilevato, che è espresso in copie per millilitro o IU / ml.

Inoltre, la PCR quantitativa fornisce informazioni sugli effetti del trattamento e sulla correttezza della terapia scelta. A seconda della quantità di materiale genico virale, può essere presa una decisione per abbreviare il periodo di trattamento o, al contrario, per prolungarlo e rafforzarlo.

Esame del sangue biochimico per l'epatite B

Il metodo di analisi biochimica è necessario per ottenere un quadro clinico completo del decorso della malattia. Questo metodo diagnostico fornisce una comprensione del lavoro degli organi interni (fegato, reni, cistifellea, tiroide e altri). La decodifica dà una comprensione del tasso metabolico nel corpo, le possibili patologie del metabolismo. Indicatori dettagliati indicheranno una mancanza di vitamine, macronutrienti e minerali necessari per la salute e la vita umana.

Puoi fare un test per l'epatite in qualsiasi altro centro diagnostico (Invitro, Gemotest, ecc.). L'analisi del sangue biochimica per l'individuazione dell'epatite B include i seguenti componenti.

Analisi quantitativa dell'enzima ALT (AlAt)

Questo enzima si trova più spesso in concentrazioni elevate nell'epatite acuta e cronica. La sostanza è contenuta nelle cellule del fegato e con le lesioni degli organi attraverso il flusso sanguigno entra nei vasi sanguigni.

La quantità e la concentrazione nel sangue durante una malattia virale sono in continua evoluzione, quindi la ricerca viene condotta almeno una volta al trimestre. ALT riflette non solo l'attività del virus dell'epatite, ma anche il grado di compromissione da esso provocato nel fegato. Il livello di ALT aumenta con l'aumentare delle quantità di sostanze tossiche di origine epatica e in presenza del virus.

Analisi quantitativa dell'enzima AST

La proteina è un componente degli organi più importanti dell'uomo: fegato, tessuto nervoso, tessuto renale, scheletro e muscoli. L'enzima è coinvolto nella costruzione del muscolo più importante: il cuore. Un alto AST in un paziente con epatite B può segnalare la fibrosi epatica. Una situazione simile si verifica quando alcol, droghe o altri danni tossici alle cellule del fegato.

Gli indicatori di surriscaldamento sono un segno di danno epatico a livello cellulare. Quando si effettua una diagnosi, è necessario prendere in considerazione il rapporto tra AST e ALT (coefficiente di de Rytis). Un aumento simultaneo della concentrazione di entrambi gli enzimi è un segno di necrosi epatica.

bilirubina

La sostanza è formata nella milza e nel fegato a causa della scomposizione dell'emoglobina nei loro tessuti. Questo componente fa parte della bile. Esistono due frazioni proteiche: bilirubina diretta (legata) e bilirubina indiretta (libera). Con un aumento della bilirubina legata al sangue, ha senso sospettare epatite o altri danni al fegato. Questo è direttamente correlato alla citolisi delle cellule epatiche.

Se la quantità di bilirubina indiretta aumenta, allora molto probabilmente c'è una lesione del tessuto parenchimale o della sindrome di Gilbert. L'alto livello di bilirubina in base ai risultati dell'analisi può essere una conseguenza dell'ostruzione dei dotti biliari. Quando il livello di bilirubina è superiore a 30 micromoli per litro, il paziente mostra una tonalità itterica della pelle, l'urina diventa scura e il bianco degli occhi cambia colore.

albumina

La sintesi di questa proteina avviene nel fegato. Se la sua quantità è ridotta, ciò indica una diminuzione della sintesi degli enzimi nel corpo a causa della presenza di gravi lesioni delle cellule epatiche.

Proteine ​​totali

Se la quantità di proteine ​​totali diventa significativamente inferiore alla norma accettata, allora questo indica un rallentamento del funzionamento del fegato.

GGT (GGTP)

Un enzima utilizzato nel rilevamento di ittero ostruttivo e colecistite. Un aumento del livello di GGT è un segnale di danno epatico tossico. Può essere provocato dall'alcolismo cronico e dall'uso incontrollato di droghe. Le proteine ​​sono particolarmente sensibili alle tossine e all'alcol, sotto la loro influenza la sua attività cresce rapidamente. Mantenere un'alta concentrazione di GGT nel sangue per un lungo periodo parla di gravi danni al fegato.

creatinina

È un prodotto del metabolismo delle proteine ​​che si verifica nel fegato. Un forte calo nel livello è un segnale che l'organo sta rallentando

Frazioni proteiche

Una diminuzione del livello delle frazioni proteiche è un segno di patologia epatica.

L'analisi di decodifica per l'epatite B e i valori sono normali

La diagnosi dell'epatite B è uno studio cumulativo di indicatori. Solo la loro analisi completa consente di trarre conclusioni sull'infezione del paziente. Considerare l'analisi di decodificazione per l'epatite B. Per confronto, il tasso di sostanze nel sangue.

Decifrazione dell'analisi del sangue per l'epatite B

Nel mondo della medicina, l'epatite B è considerata una delle più pericolose ai nostri giorni.

Questo virus è in grado di trasmettere a contatto con sangue infetto - potrebbe essere un paio di forbici per la cuticola nel salone del chiodo, strumenti medici, in particolare gli strumenti dei dentisti che non hanno subito la sterilizzazione necessaria, o non è stato eseguito in modo affidabile. Inoltre, il virus viene trasmesso sessualmente.

Al fine di accertare la malattia per l'epatite B, il paziente deve prendere il sangue per l'analisi.

Come descritto sopra, il virus può essere trasmesso sessualmente, attraverso le famiglie, appartiene al tipo di diffusione ematogena. Una volta infettato, il virus entra nelle cellule del fegato e da lì inizia a diffondersi in tutto il corpo. Il virus si diffonde attraverso il sistema circolatorio, è estremamente resistente alla temperatura e conserva la sua capacità di danneggiare le cellule viventi.

Quali esami del sangue hai per l'epatite B?

Nel caso in cui una persona abbia sperimentato i primi sintomi della malattia da epatite B, deve consultare immediatamente un medico e farsi esaminare. Quando si esamina un paziente, viene prelevato del sangue per testarlo. Il sangue viene preso a stomaco vuoto, l'ultimo pasto dovrebbe essere di almeno 8 ore fa.

Per stabilire la presenza della malattia nel corpo umano, è necessario fare tre tipi di esami del sangue:

  • La reazione a catena della polimerasi mostrerà se c'è DNA di HB V nelle cellule;
  • Esaminare la presenza di proteine ​​e antigeni nel sangue del paziente;
  • Le analisi sulla presenza di proteine ​​indicheranno una esacerbazione della malattia.

I medici conducono molto spesso test clinici su diversi marcatori al fine di stabilire un quadro completo della malattia.

Test immunologici per l'epatite B

Durante questo periodo di tempo, i test immunologici per l'epatite B sono affidabili: i test hanno lo scopo di rilevare gli anticorpi nel sangue che si formano nel fegato. In genere, il test per l'epatite B comporta la decodifica dei dati raccolti delle singole cellule proteiche. Durante il test, prestare attenzione a tali anticorpi:

  • HBsAg: possono essere trovati spesso all'inizio dell'infezione, anche prima che la malattia lasci il posto alla conoscenza. Un segno positivo indica che la persona è infetta, sebbene ci siano stati casi di risultati positivi in ​​una persona perfettamente sana. I risultati sono negativi nel caso in cui non ci siano più di 0,05 IU / ml nel corpo del paziente, con una maggiore concentrazione di anticorpi - l'analisi è positiva.
  • HBeAg: questi anticorpi si trovano in quasi tutti i pazienti infetti. Con un'alta concentrazione a lungo termine di anticorpi nel sangue, la malattia diventa una forma cronica. Un marker positivo significa esacerbazione della malattia. La presenza dell'anticorpo di cui sopra nel corpo del paziente indica che la malattia progredisce e raggiunge un picco.
  • Anti-HBc ha due tipi di anticorpi: l gG e lgM. La presenza di anticorpi IgM nel sangue suggerisce che la malattia raggiunga il suo punto più alto e sia in grado di trasformarsi in una forma cronica. I medici devono assicurarsi che questo anticorpo non aumenti il ​​numero dei suoi globuli rossi. Fortunatamente, lgG è buono, significa la formazione di immunità al virus dell'epatite B.
  • Anti-HBe - l'anticorpo dice che la malattia procede in modo normale e che l'immunità all'epatite B si forma nel corpo del paziente.
  • Anti-HBs - questo significa che il paziente è sano e il suo sistema immunitario è significativamente più forte.

Rilevazione del DNA dell'HBV mediante PCR

Per uno studio clinico che aiuterà a determinare se un paziente è stato infettato dal virus dell'epatite B, selezionare il metodo CRC. PCR è sinonimo di reazione a catena della polimerasi, studiandolo è possibile determinare la presenza di un virus nel corpo.

I risultati dello studio aiutano a determinare la presenza di un gene patogeno nelle cellule del fegato. Con la corretta procedura - i risultati sono considerati affidabili.

  • RPC di alta qualità: risultato positivo o negativo. Questa procedura è obbligatoria per tutti i pazienti con sospetta infezione da epatite B. Nel caso in cui il virus sia in piccole quantità nelle cellule del DNA, non verrà rilevato.
  • RPC quantitativo. Questo studio mostrerà non solo la presenza o l'assenza del virus, ma anche lo stadio dell'infezione. Determinando lo stadio della malattia, è possibile assegnare il corso necessario di terapia medica.

Tra le altre cose, il ROC aiuta a prescrivere accuratamente il trattamento e persino a regolare il dosaggio dei farmaci. La durata della terapia di trattamento è anche determinata, in alcuni casi può essere interrotta in anticipo, e altri pazienti richiedono un corso aggiuntivo di riabilitazione.

Esame del sangue biochimico per l'epatite B

Al fine di rendere l'intera immagine dell'infezione e il decorso della malattia, è necessario effettuare un esame del sangue biochimico. Questo studio aiuterà a determinare le condizioni degli organi interni del paziente e il loro funzionamento. Le analisi forniscono un quadro generale dei processi metabolici nel corpo e parlano anche del tasso metabolico.

L'analisi biochimica indicherà anche tutte le vitamine e gli oligoelementi necessari all'organismo per combattere normalmente la malattia e rafforzare il sistema immunitario.

I test dell'epatite B possono essere eseguiti in qualsiasi clinica, privata o pubblica. Quando un virus dell'epatite B viene rilevato nel corpo umano, mediante analisi biochimica, ci sono tali componenti.

Analisi quantitativa dell'enzima ALT (AlAt)

Questo enzima può essere trovato in alte concentrazioni, con lo sviluppo o la forma cronica di infezione con il virus dell'epatite B. L'enzima si trova nelle cellule del fegato e, a causa del flusso sanguigno, si diffonde attraverso tutte le navi.

La concentrazione della sostanza nel corpo cambia continuamente a causa di ciò che dovrebbe essere effettuato analisi una volta al trimestre. Grazie a ALT, è possibile indagare non solo l'attività del virus, ma anche valutare l'entità del suo effetto negativo sul fegato e sull'organismo nel suo complesso.

Analisi quantitativa dell'enzima AST

La proteina è una delle sostanze più importanti nel corpo umano, tutti gli organi vitali sono costruiti da esso, incluso il cuore. Con la malattia dell'epatite B, un alto tasso di AST indica la fibrosi epatica.

I tassi elevati indicano la distruzione delle cellule del fegato. Per la diagnosi finale, deve essere considerato il rapporto tra AST e ALT. Con un'alta concentrazione di entrambi gli enzimi, si sviluppa la necrosi epatica.

bilirubina

L'emoglobina è scomposta nei tessuti del fegato e della milza, grazie ai quali appare una sostanza come la bilirubina. Questo componente è la base della bile. La bilirubina può essere diretta e indiretta. Con un'alta concentrazione di bilirubina diretta nel sangue, è possibile stabilire l'infezione da epatite B o altre malattie del fegato.

Un'alta concentrazione di bilirubina non diretta nel sangue parla della sindrome di Gilbert. Inoltre, un'alta concentrazione di qualsiasi bilirubina segnala una scarsa pervietà dei dotti biliari. Quando viene infettata dall'epatite, l'urina diventa scura, il viso e il bianco degli occhi diventano gialli.

albumina

L'albumina è una proteina sintetizzata nel fegato. Con bassi livelli di questa proteina nel corpo, le cellule del fegato sono danneggiate.

Proteine ​​totali

La diminuzione della concentrazione di proteine ​​totali nel corpo del paziente indica una violazione del fegato.

GGT (GGTP)

Questo enzima viene utilizzato dai medici per rilevare l'ittero o la colecistite. Livelli elevati di GGT indicano danni tossici alle cellule del fegato, che possono verificarsi a causa di alcolismo cronico o intossicazione da farmaci. Le proteine ​​sono estremamente sensibili all'alcol e alle tossine e quando sono eccessive, l'attività della proteina aumenta.

creatinina

Il metabolismo delle proteine ​​si verifica nel fegato e il prodotto di questo metabolismo in medicina è chiamato creatinina. Quando il livello di creatinina diminuisce, il fegato rallenta.

Frazioni proteiche

Un basso livello di frazioni proteiche indica una chiara violazione del fegato.

L'analisi di decodifica per l'epatite B e i valori sono normali

Per diagnosticare un virus, è necessario condurre una serie di studi diversi. I risultati di tutti i test nel complesso daranno un quadro chiaro della malattia.

L'essenza dell'analisi della PCR per l'epatite B e i suoi risultati

L'epatite B virale viene trattata con successo se viene rilevata nel tempo e il numero di anticorpi e antigeni nel sangue del paziente è correttamente determinato. Con l'aiuto di un saggio immunoenzimatico per l'epatite, è possibile rilevare la presenza di marcatori virali, ma non è possibile determinare lo stadio esatto del processo.

Per la valutazione quantitativa è stata utilizzata la diagnostica PCR. Utilizzando il test, è possibile contare il numero di marker, prevedere il decorso della malattia e la probabilità di cura con l'aiuto di farmaci antivirali.

Il vantaggio principale dello studio è la capacità di rilevare anche concentrazioni minime del virus, per identificare l'agente patogeno nella fase di specie.

Diagnosi di epatite B

Il virus dell'epatite B è altamente contagioso e resistente alle influenze esterne. Rimane attivo nel sangue di un paziente per diverse settimane. Pertanto, ogni persona è a rischio di infezione, anche se si osserva la profilassi.

Per diagnosticare la malattia si prescrivono i seguenti studi:

L'essenza del metodo PCR

Il chimico americano K. Mullis ha ricevuto il premio Nobel e il suo metodo diagnostico è ancora usato.

L'antenato del metodo PCR (reazione a catena della polimerasi) è considerato uno scienziato norvegese H. Kleppe. Inizialmente ha iniziato a eseguire l'amplificazione (recupero) del DNA usando una catena corta di DNA, cioè un primer sintetico (una sorta di copia).

Tuttavia, lo scienziato non è riuscito a realizzare la sua idea. Studi simili sono stati fatti dal chimico americano K.Mullis, che nel 1993 ha ricevuto il premio Nobel per la sua invenzione. Da allora, la PCR è stata utilizzata per stabilire la paternità, diagnosticare malattie genetiche e rilevare i virus.

L'essenza della reazione è che con l'aiuto degli enzimi viene copiato un certo pezzo di DNA. È possibile copiare solo l'area che corrisponde ai parametri specificati e se si trova nel campione presentato. I seguenti componenti sono utilizzati per iniziare la reazione:

  1. DNA matrice con un sito da copiare.
  2. Primer simili nella struttura del DNA.
  3. Polimerasi, cioè l'enzima che innesca la reazione. Dovrebbe essere termostabile, cioè per resistere a temperature estreme.
  4. Soluzione con determinati parametri, garantendo il passaggio della reazione.

La reazione viene eseguita in più fasi:

Per la rilevazione dell'epatite B vengono utilizzati due tipi di reazioni: quantitativa e qualitativa.

PCR quantitativa

Il metodo quantitativo determina la quantità del genoma dell'HBV

La PCR quantitativa comporta la creazione simultanea di copie di frammenti di DNA e la determinazione del numero di molecole. La misurazione viene eseguita dopo ogni fase, cioè in tempo reale. Questo risultato è ottenuto utilizzando sonde fluorescenti, che sono incluse in una catena di molecole e si illuminano in un certo periodo dello studio.

Questo metodo viene utilizzato per rilevare i frammenti di DNA che sono marcatori del virus dell'epatite. Utilizzando il metodo quantitativo, è possibile isolare con precisione il genotipo del virus. In altre parole, viene calcolato il numero di copie del genoma dell'HBV per numero di cellule del paziente.

L'analisi quantitativa fornisce risposte alle seguenti domande:

  1. Con quale intensità progredisce la malattia.
  2. Quanto è efficace il trattamento.
  3. Si è sviluppata la resistenza ai farmaci?

Inoltre, la misurazione quantitativa è necessaria per la diagnosi della fase cronica dell'infezione. Se la quantità di DNA è inferiore a 100 pz / ml al livello normale di transaminasi, la persona è portatrice del virus.

Nella fase acuta, la quantità di anticorpi è molto più alta.Nella terapia antivirale, un aumento del numero di anticorpi indica lo sviluppo della resistenza ai farmaci, che è un segnale per regolare il trattamento.

PCR di alta qualità

La PCR di alta qualità fornisce meno informazioni, ma può eliminare l'infezione.

La PCR di alta qualità può solo stabilire la presenza del patogeno nel sangue. Se sono assenti, il paziente non è infetto, se l'agente patogeno entra nel sangue, il risultato sarà positivo.

Tuttavia, con l'aiuto della reazione qualitativa è impossibile chiarire il genoma del virus, lo stadio della malattia. Pertanto, per la diagnosi dell'HBV sono state eseguite misure sia quantitative che qualitative.

Preparazione per il sondaggio

Il sangue venoso è richiesto per l'analisi PCR. Questo deve essere fatto al mattino a stomaco vuoto.

Il paziente deve prepararsi adeguatamente allo studio:

  1. Per 10 ore per rifiutare il cibo, puoi bere solo acqua pulita.
  2. Alla vigilia di smettere di prendere alcolici, per 4 ore non fumare.
  3. Prima dell'esame dovrebbe evitare lo stress fisico ed emotivo.
  4. Interrompere l'uso di farmaci per 2 giorni, se ciò non è possibile, è necessario informare il tecnico di laboratorio. Alcuni farmaci hanno un effetto sul risultato finale.

Interpretazione dei dati

In una reazione quantitativa, gli indicatori ottenuti vengono valutati in base al numero di copie del DNA.

È facile interpretare i dati di misurazione della qualità. Dà una risposta positiva o negativa.

In una reazione quantitativa, è possibile valutare gli indicatori ottenuti in base al numero di copie del DNA. L'unità di misura è copie / ml.

I dati sono decodificati come segue:

  1. Se la quantità di DNA dell'HBV è inferiore a 90, l'infezione è assente. Il paziente ha sviluppato l'immunità post-vaccinazione, oppure è stato curato dalla malattia.
  2. Quando il numero di copie 2x100 parla del vettore del virus.
  3. Il numero 2x106 indica uno stadio cronico della malattia.
  4. Con il DNA più di 2x109, il paziente ha uno stadio acuto di epatite.

Risultati errati

I vantaggi del metodo diagnostico usando le reazioni della polimerasi sono i seguenti:

  1. Rilevazione diretta di agenti patogeni. Al contrario, l'ELISA fornisce informazioni sulla presenza di anticorpi al virus.
  2. Specificità. Cioè, è la regione del DNA che è presente nel campione di biomateriale che viene copiato.
  3. Ipersensibilità. Il metodo può anche rilevare frammenti di singole cellule.
  4. Diagnosi di malattie negli stadi acuti e latenti. Cioè, è possibile diagnosticare la malattia allo stadio delle manifestazioni precliniche.

Il metodo ha difetti che portano a risultati falsi. Lo svantaggio più significativo è la probabilità di contaminazione del materiale. La principale fonte di contaminazione è rappresentata da provette, mani di laboratorio, reagenti scarsamente trasformati.

Parte del DNA di una precedente reazione può entrare nel sangue. Pertanto, i laboratori hanno bisogno di maggiori requisiti sanitari: stanze separate, tubi di plastica, trattamento ultravioletto dei laboratori, ecc.

Risultati falsi negativi possono essere dovuti alla ridotta sensibilità della reazione. Questo succede nelle seguenti situazioni:

  • il paziente sta assumendo farmaci, ad esempio, anticoagulanti;
  • la persona ha sofferto di stress fisico prima dell'analisi (fare sport, lavorare sodo);
  • l'infezione si è verificata di recente.

Se il paziente ha un'alta probabilità di infezione e il risultato dello studio è negativo, deve essere riesaminato.

Vedi anche:

conclusione

Il metodo di reazione a catena della polimerasi è il principale e più informativo per la diagnosi dell'HBV. Permette non solo di stabilire lo stato portatore dell'infezione, ma anche di chiarire lo stadio della malattia, per valutare i risultati del trattamento.

Per una diagnosi più accurata, viene utilizzata una misurazione qualitativa e quantitativa. Gli svantaggi del metodo includono la probabilità di contaminazione, la sensibilità ridotta e un prezzo piuttosto elevato.

Affinché i risultati siano più affidabili, è necessario prepararsi adeguatamente allo studio e condurlo in clinica con la licenza appropriata e la buona reputazione.